安賽蜜中文名稱為乙酰磺胺酸鉀，為人工合成甜味劑， 經常食用合成甜味劑超標的食品會對人體的肝臟和神經系統造成危害， 特別是對老人、孕婦、小孩危害更為嚴重。如果短時間內大量食用，會引起血小板減少導致急性大出血。因此需按業內標準嚴格控制，本文推出了一種高效液相色譜測定食品中的安賽蜜的方法。

       1、原理

       試樣中安賽蜜經高效液相反向C18柱分離后,以保留時間定性,外標法定量。

       2、試劑

       除非另有說明, 所有試劑均為分析純, 水為GB/T6628 規定的一級水。

       (1) 0102mol 乙酸胺溶液:稱取1154g 乙酸銨加水溶解定容至1000ml ,經濾膜(0145um) 過濾。

       (2) 甲醇:色譜純。

       (3) 10 %亞鐵氰化鉀溶液。

       (4) 20 %乙酸鋅溶液。

       (5) 安賽蜜標準儲備液,精稱安賽蜜0.1000g , (基準試劑或者標準物質) ,用純水溶解。移入100ml 容量瓶中,加水定容至刻度,即含安賽蜜1mg/ ml 。

       (6) 安賽蜜使用液, 準確移取標準儲備液10ml 于100ml 容量品種。加水至刻度,即為0.1mg/ ml 。然后分別移取此液2ml 4ml 6ml 8ml 10ml 于50ml 容量瓶中即得含安賽蜜4ug/ ml 8ug/ ml 12ug/ ml16ug/ ml 20ug/ ml 的標準液系列。

       3、儀器

       (1) 高效液相色譜儀(帶紫外檢測器) 。

       (2) 分析天平: 010001g 和0101g。

       (3) 超聲清洗儀(溶劑脫氣用) 。

       (4) 離心機轉速不低于4000r/ min。

       (5) 蝸旋混勻器

       4、分析步驟

       (1) 汽水、可樂型飲料:將試樣溫熱,攪拌除去二氧化碳或超聲脫氣。吸取5ml 試液至50ml 容量瓶中,加水約20ml 蝸旋混勻調PH 至中性, 定容至刻度, 搖勻, 過0.45um 的濾膜,待HPLC 分析用。

       (2) 果汁果茶類:吸取5ml 試液至50ml 容量瓶中,加水約20ml 蝸旋混勻調PH 至中性,定容至刻度,離心10分鐘(4000r/ min) ,取上清液過0.45um 的濾膜,待HPLC分析用。

       (3) 植物蛋白飲料、乳飲料、醬油、果醬、冷飲:稱取(2～5) g 試樣于50ml 容量瓶中加入10 %亞鐵氰化鉀、20 %乙酸鋅溶液各(1～3) ml (視蛋白含量多少) ,調PH 值至中性,用水定容至刻度,搖勻,靜置沉淀后用中速定性濾紙過濾,濾液再用0.45um 濾膜過濾,待HPLC 分析用。

       (4) 面包、糕點、糖果、果凍、炒制堅果等固體類:稱取粉碎試樣(2～5) g 于50ml 容量瓶中加入10 %亞鐵氰化鉀、20 %乙酸鋅溶液各(1～3) ml (視蛋白含量多少) ,調PH 值至中性,用水定容至刻度,搖勻,靜置沉淀后用中速定性濾紙過濾,濾液再用0.45um濾膜過濾待HPLC分析用。

       5、測定

       (1) 高效液相色譜參考條件

       色譜柱: YWG—C18 416mm ×150mm 粒徑5um

       流動相:甲醇:乙酸銨溶液(0102mo1/ 1) (5 :95)

       流速:1m1/ min

       進樣量:10ul

       檢測器:紫外檢測器,230nm

       (2) 標準曲線: 分別進樣含安賽蜜、4ug/ ml 8ug/ ml 12ug/ ml 16ug/ ml 20ug/ ml 標準溶液各10ul ,進行HPLC 分析,然后以峰面積為縱坐標,以安賽蜜的含量為橫坐標,繪制標準曲線。

       (3) 試樣測定: 吸取處理后的試樣溶液10ul 進行HPLC 分析,測定其峰面積,從標準曲線查得測定液中安賽蜜的含量。

       6、結果計算

       試樣中安賽蜜的含量按下式計算;

       X =C ×V ×1000/M ×1000

       式中:

       X —試樣中安賽蜜的含量,單位為毫克每千克或毫克每升(mg/ kg 或mg/ L) ;

       C —由標準曲線上查得進樣液中安賽蜜的量,單位為微克每毫升(ug/ ml) ;

       V —試樣稀釋液總體積,單位為毫升(ml) ;

       M —試樣質量,單位為克或毫升(g 或ml) 。

       7、加標回收率

       空白果汁飲料樣品加標回收率結果見表1 。加標回收安賽蜜回收率在9318 % ～10118 % ,平均回收率為97.75 %。實驗證明用此方法測定食品中的安賽蜜,操作簡便,分析結果準確、工作效率高,此方法切實可行。

附：汶顥商城，高效液相色譜儀——http://www.sys17.cn/goods.php?id=405